Rnase A
Ribonukleaas A (RNaseA) on üheahelaline polüpeptiid, mis sisaldab 4 disulfiidsidet molekulmassiga umbes 13,7 kDa.RNaas A on endoribonukleaas, mis lagundab spetsiifiliselt üheahelalist RNA-d C- ja U-jääkide juures.Täpsemalt, lõhustamine tunneb ära fosfodiestersideme, mis on moodustatud nukleotiidi 5'-riboosist ja külgneva pürimidiini nukleotiidi 3'-riboosil olevast fosfaatrühmast, nii et 2,3'-tsüklilised fosfaadid hüdrolüüsitakse vastavaks 3-ks. nukleosiidfosfaadid (nt pG-pG-pC-pA-pG lõhustatakse RNaas A poolt, et tekitada pG-pG-pCp ja A-PG).RNaas A on kõige aktiivsem üheahelalise RNA lõikamisel.Soovitatav töökontsentratsioon on 1-100 μG/mL, mis sobib erinevate reaktsioonisüsteemidega.Madalat soolakontsentratsiooni (0-100 mM NaCl) saab kasutada üheahelalise RNA, kaheahelalise RNA ja RNA-DNA hübridisatsioonil tekkinud RNA ahelate lõikamiseks.
Kuid kõrge soolakontsentratsiooni korral (≥0,3 M) lõhustab RNaas A spetsiifiliselt ainult üheahelalist RNA-d.
RNaas A kasutatakse kõige sagedamini RNA eemaldamiseks plasmiidse DNA või genoomse DNA valmistamise ajal.See, kas DNaas on ettevalmistusprotsessi ajal aktiivne või mitte, võib reaktsiooni kergesti mõjutada.Traditsioonilist veevannis keetmise meetodit saab kasutada DNaasi aktiivsuse inaktiveerimiseks.See toode ei sisalda DNaasi ja proteaasi ning ei vaja enne kasutamist kuumtöötlust.Lisaks saab seda toodet kasutada ka molekulaarbioloogilistes katsetes, nagu RNaasi kaitseanalüüs ja RNA järjestuse analüüs.
Säilitustingimused
Toodet tuleb hoida temperatuuril -25 ℃ ~ - 15 ℃ 2 aastat.
Tehnilised andmed
| Välimus | pulber |
| Kogus | 100 mg / 1 g |
| Toote tüüp | RNaas A |
Juhised
See on üks levinumaid meetodeid RNaas A säilituslahuse valmistamiseks.Seda saab ka valmistadamuude meetoditega vastavalt traditsioonilistele meetoditele laboris või teatmekirjanduses (ntlahustub vahetult 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 või Tris-NaCl lahuses)
1. Kasutage 10 mg/ml RNaasi A säilituslahuse valmistamiseks 10 mM naatriumatsetaati (pH 5,2).
2. Kuumutamine 100 ℃ juures 15 min.
3. Jahutage toatemperatuurini, lisage 1/10 mahust 1 M Tris-HCl (pH 7,4), reguleerige selle pH väärtusele 7,4 (eestNäiteks lisage 500 ml 10 mg/ml RNaasi säilituslahust 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Alampakendatud temperatuuril -20 ℃ külmutatud säilitamiseks, mis võib olla stabiilne kuni 2 aastat.
[Märkused]:
RNaasA lahuse keetmisel neutraalsetes tingimustes moodustub RNaasi sade;Keeda seda madalama pH juures ja kui on sademeid, võib seda täheldada, mis võib olla põhjustatud valgulisandite olemasolust.Kui pärast keetmist leitakse setet, saab lisandid eemaldada suure kiirusega tsentrifuugimisega (13 000 pööret minutis) ja seejärel alampakendada külmutamiseks.
Märkmed
Palun kandke oma tervise ja ohutuse tagamiseks vajalikke isikukaitsevahendeid, näiteks laborikittlit ja kindaid.
