Proovi vabastav reaktiiv
Proovi vabastamise reaktiiv on mõeldud molekulaarsete POCT-diagnostika stsenaariumide jaoks.Otsese amplifikatsiooni LAMP ja otsese amplifikatsiooni PCR kahe süsteemi puhul ei ole nukleiinhappe ekstraheerimist vaja.Proovi toorlüsaati saab otse amplifitseerida, sihtgeeni saab täpselt tuvastada, proovi tuvastamise aega saab veelgi lühendada, mis vastab ideaalselt molekulaarse POCT rakendusnõuetele.See sobib ninatampoonideks, kurgutampoonideks ja muudeks proovitüüpideks.Töödeldud proove saab otse kasutada reaalajas fluorestsents-kvantitatiivseks PCR või LAMP tuvastamiseks ning tavapäraste ekstraheerimismeetoditega samad tulemused on võimalik saavutada ilma keeruliste nukleiinhapete ekstraheerimisoperatsioonideta.
Säilitamistingimused
Transportida ja hoida toatemperatuuril.
Kvaliteedi kontroll
Funktsionaalne tuvastamine – kvantitatiivne qPCR: 800 μl proovi vabastamise reaktiivi süsteemi võimendati
1000 koopiaga uudne pseudoviirus, üks nina tampooniproov, mille tulemuseks on sarnased amplifikatsioonikõverad jaΔCt väärtused ± 0,5 Ct piires.
Eksperimentaalne protseduurres
1. Võtke 800 μl proovi vabastavat reaktiivi ja jaotage lüüsilahus 1,5 ml proovivõtturisse
2. Võtke tampooniga nina või kurgu tampoon;Nina tampooni proovivõtu protseduur: võtke steriilne tampoon ja asetage see ninasõõrmetesse, liigutage aeglaselt umbes 1,5 cm sügavusele, pöörake õrnalt 4 korda vastu nina limaskesta rohkem kui 15 sekundit. , seejärel korrake sama toimingut sama tampooniga ka teises ninaõõnes. Kurgutampooniproovi võtmise protseduur: võtke steriilne tampooniga tampooni ja pühkige õrnalt 3 korda kiiresti neelumandlid ja neelu tagumine sein.
3.Asetage tampoon kohe proovivõtutorusse.Tampoonipead tuleb pöörata ja segada säilituslahuses vähemalt 30 sekundit, et proov oleks proovivõtturis täielikult elueeritud.
4. Inkubeerimine toatemperatuuril (20-25 ℃) 1 min, lüüsipuhvri valmistamine on lõpetatud.
5. Nii 25 μl süsteemne RT-PCR kui ka RT-LAMP ühildusid tuvastamiskatsete jaoks 10 μl matriitsi lisamisega.
Märkmed
1. Ühele tampoonile vastava proovi otsese lüsaadi minimaalset kogust saab reguleerida 400 μl-ni, mida saab kohandada vastavalt testimisvajadustele.
2. Kui proovi on proovi vabastava reagendiga töödeldud, on soovitatav katse järgmine faas läbi viia niipea kui võimalik, ooteaeg on eelistatavalt alla 1 tunni.
3. Proovilüsaadi pH on happeline ja tuvastamissüsteemil peab olema teatud puhver.See sobib enamiku PCR, RT-PCR ja LAMP fluorestsentsi tuvastamiseks pH puhvriga, kuid ei sobi LAMP kolorimeetriliseks tuvastamiseks ilma puhvrita.
