DNaas I (Rnaasivaba) (5 u/ul)
Kassi nr: HC4007A
DNaas I (desoksüribonukleaas I) on endodesoksüribonukleaas, mis suudab seedida ühe- või kaheahelalist DNA-d.See tunneb ära ja lõhustab fosfodiestersidemeid, et toota monodeoksünukleotiide või ühe- või kaheahelalisi oligodeoksünukleotiide, mille 5'-otsas on fosfaatrühmad ja 3'-otsas hüdroksüülrühmad.DNaas I aktiivsus sõltub Ca2+ja neid saab aktiveerida kahevalentsetel metalliioonidel nagu Mn2+ja Zn2+.5 mM Ca2+kaitseb ensüümi hüdrolüüsi eest.Mg juuresolekul2+, võib ensüüm juhuslikult ära tunda ja lõigata mis tahes saidi mis tahes DNA ahelas.Mn juuresolekul2+, saab DNA kaksikahelaid samaaegselt ära tunda ja lõigata peaaegu samast kohast, et moodustada lamedate otstega DNA fragmente või kleepuva otsaga DNA fragmente, millel on 1-2 nukleotiidi.
Komponendid
| Nimi | 0,1KU | 1KU | 5 KÜ | 50 KÜ |
| DNaas I, RNaasivaba | 20 μL | 200 µl | 1 ml | 10 ml |
| 10 × DNAase I puhver | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Säilitustingimused
-25 ℃ ~ -15 ℃ ladustamiseks;Transport jääpakkide all.
Juhised
1. Valmistage reaktsioonilahus RNaasi-vabas katseklaasis allpool loetletud proportsioonide kohaselt.
| Komponent | Helitugevus |
| RNA | X µg |
| 10 × DNAase I puhver | 1 μL |
| DNaas I, RNaasivaba (5U/μL) | 1 U µg RNA① kohta |
| ddH2O | Kuni 10 μL |
Märkus: ①Arvutage RNA koguse põhjal lisatava DNaas I maht.
2. 37 ℃ 15 minutit;
3. Lisage 0,5 M EDTA lõppkontsentratsioonini 2,5-5 mM ja kuumutage reaktsiooni peatamiseks 10 minutit temperatuuril 65 ℃.Proovi saab otse kasutada järgmise reaktsiooni jaoks, näiteks pöördtranskriptsioonikskatse.
Ühiku määratlus
Üks ühik on defineeritud kui ensüümi kogus, mis lagundab täielikult 1 µg pBR322DNA 10 minutiga 37 ℃ juures.
Kvaliteedi kontroll
RNaas:5 U DNaasi I koos 1,6 µg MS2 RNA-ga 4 tundi temperatuuril 37 ℃ ei põhjusta lagunemist, kunamääratud agaroosgeelelektroforeesiga.
Märkmed
1. Palun valmistage 0,5MEDTA ise.
2. Kasutage 1U DNaas I µg RNA kohta.Kui RNA-d on aga alla 1 µg, kasutage 1U DNaas I.
3. Palun asetage ensüüm töötamise ajaks jääle.
