Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kassi nr: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) on multipleksne kvantitatiivne PCR komplekt, mis põhineb matriitsina RNA-l.Katse käigus viidi samas katseklaasis läbi pöördtranskriptsioon ja kvantitatiivne PCR, mis lihtsustas katsetoimingut ja vähendas saastumise ohtu.Selles komplektis sünteesiti esimese ahela cDNA tõhusalt kuumakindla pöördtranskriptaasi abil ja amplifitseeriti kvantitatiivselt HotStart Tag DNA polümeraasi abil.Komplekt sisaldab peamiselt optimeeritud MP puhvrit, ensüümide segu jne. Puhverlahus sisaldab juba Mg-d2+ja dNTP.Lisaks lisatakse tegurid, mis võivad tõhusalt pärssida mittespetsiifilist PCR amplifikatsiooni ja parandada mitme qPCR reaktsiooni amplifikatsiooni efektiivsust, mis võivad tagada amplifikatsiooni efektiivsuse ja viia läbi kuni mitmekordse amplifikatsiooni reaktsiooni.Aerosooli saastumise ohu tõhusaks vältimiseks lisati süsteem dUTP/UDG.
Komponendid
1. Puhver
2. Ensüümi segu
Spetsifikatsioon
| Kuum algus | Sisseehitatud kuumkäivitus |
| Tuvastamismeetod | Praimer-sondi tuvastamine |
| PCR meetod | Üheastmeline RT-qPCR |
| Polümeraas | Taq DNA polümeraas |
| Proovi tüüp | DNA |
Säilitamistingimused
Toode tarnitakse kuiva jääga ja seda saab säilitada temperatuuril -25-15 ℃ 1 aasta.Seda tuleks vältida sagelikülmutada-sulatada.Soovitav on salvestada eraldi.
Juhised
1.Reaktsioon Süsteem
| Komponendid | Maht (μL) | Lõplik kontsentratsioon |
| 2 × MP puhver | 12.5 | 1× |
| Ensüümi segu | 1 | - |
| Krundi/sondi segu (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Malli RNA | 1-10 | - |
| RNaasi vaba H2O | kuni 25 | - |
Märkused:
Enne kasutamist segage kindlasti hästi, vältige tugevast vibratsioonist põhjustatud liigseid mullid.
a.Praimeri kontsentratsioon: Krundi segu, mis sisaldab multiplekspraimerit, sõltuvalt olukorrast võib praimeri optimaalne kontsentratsioon olla vahemikus 0,1 kuni 1,0 μM.
b.Sondi kontsentratsioon: sondi segu, mis sisaldab mitmekordse sondi märgistamise erinevuse fluorestsentsrühma, sõltuvalt olukorrast võib sondi optimaalne kontsentratsioon olla vahemikus 0,05 kuni 0,5 μM.
c.Malli lahjendamine: qPCR on väga tundlik ja matriitsi on soovitatav lahjendada.Kontroll-Ct väärtus on sobiv vahemikus 20 kuni 35.
d.Süsteemi ettevalmistamine: Valmistage ette ülipuhta töölaud ning pipett ja reaktsioonitoru ilma nukleaasijääkideta;soovitatav on kasutada püstoli pead koos filtrielemendiga.Vältige ristsaastumist ja aerosooliga saastumist.
2. Optimeeritud jalgrattasõitProtokoll
| Tsükkel samm | Temp. | Aeg | Tsüklid |
| Pöördtranskriptsioon | 50℃a | 20 minutit | 1 |
| Esialgne-denatureerimine | 95℃ | 5 minutit | 1 |
| Amplifitseerimisreaktsioon | 95℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60℃ b | 30 sek c |
Märkused:
a.Pöördtranskriptsioon: temperatuuri saab valida 42°C või 50°C.
b.Amplifitseerimisreaktsioon: temperatuuri reguleeritakse vastavalt kavandatud praimerite Tm väärtusele.
c.Fluorestsentssignaali hankimine: palun määrake katseprotseduur vastavalt seadme kasutusjuhendi nõuetele.
Märkmed
Palun kandke oma tervise ja ohutuse tagamiseks vajalikke isikukaitsevahendeid, nagu laborikittel ja kindad.
