Robustart Taq DNA polümeraas

Robustart Taq DNA polümeraas on kuumkäivitusega DNA polümeraas.See toode ei suuda mitte ainult paremini pärssida mittespetsiifilist reaktsiooni, mis on põhjustatud praimerite mittespetsiifilisest anniilimisest või praimerite agregatsioonist PCR-süsteemi ettevalmistamise ja amplifikatsiooni protsessis.Seetõttu on sellel suurepärane spetsiifilisus ja see on efektiivsem madala kontsentratsiooniga matriitsi amplifitseerimiseks ning sobib multipleksitud PCR-i amplifikatsioonireaktsiooniks.Veelgi enam, sellel tootel on väga hea rakendatavus ja erinevat tüüpi PCR-reaktsioonides on võimalik saada stabiilseid amplifikatsioonitulemusi.

Komponendid

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polümeraasi

2.10 × PCR puhver II (Mg²+ vaba) (valikuline)

3.25 mM MgCl₂(valikuline)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ vaba) ei sisalda dNTP ja Mg²+, palun lisage dNTP ja MgCl₂reaktsioonisüsteemi ettevalmistamisel.

Soovitatavad rakendused

1.Kiire võimendus.

2.Mitmekordne võimendus.

3.Vere, tampooni ja muude proovide otsene amplifikatsioon.

4.Hingamisteede haiguste avastamine.

Ladustamise seisukord

-20°C pikaajaliseks säilitamiseks, tuleb enne kasutamist korralikult läbi segada, vältida sagedast külmutamist-sulatamist.

*Kui pärast jahutamist tekib sademeid, on see normaalne;enne segamist ja kasutamist on soovitatav tasakaalustada toatemperatuurini.

Ühiku määratlus

Üks aktiivne ühik (U) on defineeritud kui ensüümi kogus, mis lisab 10 nmol desoksüribonukleotiidi happes lahustumatusse materjali temperatuuril 74 °C 30 minuti jooksul, kasutades matriitsi/praimerina aktiveeritud lõhe sperma DNA-d.

Kvaliteedi kontroll

1.SDS-PAGE elektroforeetiline puhtus on suurem kui 98%.

2.Võimendi tundlikkus, partii-partii juhtimine, stabiilsus.

3.Puudub eksogeenne nukleaasi aktiivsus, eksogeense endonukleaasi või eksonukleaasi saastumine

Juhised

Reaktsiooni seadistamine

Märkused:

1) a.Puhver ei sisalda dNTP ja Mg²+, palun lisage dNTP ja MgCl₂reaktsioonisüsteemi ettevalmistamisel.

2) b.Kui kasutatakse qPCR/qRT-PCR jaoks, tuleb reaktsioonisüsteemi lisada fluorestseeruvad sondid.Tavaliselt annab hea tulemuse praimeri lõppkontsentratsioon 0,2 μM;kui reaktsioon on halb, saab praimeri kontsentratsiooni reguleerida vahemikus 0,2-1 μM.Sondi kontsentratsioon on tavaliselt optimeeritud vahemikus 0,1-0,3 μM.Praimeri ja sondi parima kombinatsiooni leidmiseks võib läbi viia kontsentratsioonigradiendi katseid.

Termilise rattasõidu protokoll

Märkmed

1.Kiire DNA polümeraasi amplifikatsioonikiirus ei tohiks olla väiksem kui 1 kb/10 s.Erinevate PCR-seadmete temperatuuri tõusu ja languse kiirus, temperatuuri reguleerimise režiim ja soojusjuhtivuse efektiivsus on väga erinevad, seetõttu on soovitatav optimeerida konkreetse kiire PCR-instrumendi jaoks optimaalsed reaktsioonitingimused.

2.Süsteem on väga kohandatav, suurema spetsiifilisuse ja tundlikkusega.

3.Sobib kasutamiseks kõrge tundlikkusega PCR tuvastamisreagentidena ja seda saab kasutada mitmekordsetes PCR amplifikatsioonireaktsioonides.

4.5′→3′ polümeraasi aktiivsus, 5′→3′ eksonukleaasi aktiivsus;puudub 3′→5′ eksonukleaasi aktiivsus;korrektuurfunktsioon puudub.

5.Sobib PCR ja RT-PCR kvalitatiivseks ja kvantitatiivseks testimiseks.

6.PCR-produkti 3'-ots on A, mida saab otse T-vektorisse kloonida.

7.Kolmeetapiline meetod on soovitatav madala anniilimistemperatuuriga praimerite või pikemate kui 200 aluspaari pikkuste fragmentide amplifitseerimiseks.