One Step RT-qPCR SYBR roheline eelsegu
Kassi nr: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix on fluorestsentsi kvantifitseerimiseks, mis põhineb SYBR Green I värvil.Geenispetsiifilisi praimereid kasutades viiakse pöördtranskriptsioon ja qPCR reaktsioonid lõpule ühes katseklaasis, mis välistab vajaduse korduvate korgi avamise ja pipeteerimise operatsioonide järele, parandades oluliselt analüüsi efektiivsust ja vähendades saastumise ohtu.RNA proovide jaoks kasutab komplekt tõhusaks cDNA sünteesiks kuumuskindlat pöördtranskriptaasi ja kvantitatiivseks amplifikatsiooniks HotStart Taq DNA polümeraasi.Optimeeritud puhversüsteemi korral võib komplekti tundlikkus olla kuni 0,1 pg kõrge ekspressiooniga sihtmärkide korral ja kuni 1 pg mõõdukalt ekspresseeritud sihtmärkide puhul.Komplekt sobib DNA proovide amplifitseerimiseks ja kvantifitseerimiseks.See võimaldab nukleiinhapete tundlikku tuvastamist ja kvantifitseerimist erinevatest taime- ja loomaproovidest, rakkudest ja mikroorganismidest.
Komponendid
| No | Nimi | Helitugevus | Helitugevus |
| 1 | Täiustatud puhver | 250 μL | 2 × 1,25 ml |
| 2 | Täiustatud ensüümide segu | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNaasi vaba H2O | 250 μL | 2 × 1,25 ml |
Säilitamistingimused
Seda toodet tuleb hoida temperatuuril -25–15 ℃ valguse eest kaitstult 1 aasta.
Juhised
1.Reaktsioonisüsteemi konfiguratsioond
| Komponendid | Maht (μL) | Maht (μL) | Lõplik kontsentratsioon |
| Täiustatud puhver | 12.5 | 25 | 1× |
| Täiustatud ensüümide segu | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Pöördpraimer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNaasi vaba H2Oc | kuni 25 | kuni 50 | - |
Märkused:
1) a.Tpraimeri lõplik kontsentratsioon oli 0,2 μmol/L, mida võis vastavalt vajadusele reguleerida 0,1 ja 1 μmol/L vahel.
2) b.Reaktiiv on äärmiselt tundlik, kogu RNA-ga vahemikus 1 pg–1 μg ja inimproovide testimine näitas optimaalset sisendit 1 pg–100 ng, kontrollides, et üldine Ct väärtus oleks vahemikus 15–30.
3) c.Sihtgeeni amplifikatsiooni kehtivuse ja reprodutseeritavuse tagamiseks on soovitatav kasutada 20 μL või 50 μL.
4) d.Palun valmistuge ülipuhtal pingil ja kasutage nukleaasijäägivaba otsikuid ja reaktsioonitorusid;Soovitatav on filtrikassettidega otsikud.Vältige ristsaastumist ja aerosooliga saastumist.
2.Reaktsiooniprogramm
| Tsükli samm | Temp. | Aeg | Tsüklid |
| Pöördtranskriptsioon | 50℃a | 6 minutit | 1 |
| Esialgne denaturatsioon | 95℃ | 5 minutit | 1 |
| Amplifitseerimisreaktsioon | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60℃b | 30 sek | ||
| Sulamiskõvera etapp | Instrumendi vaikesätted | 1 | |
Märkused:
1) a.Pöördtranskriptsiooni temperatuuri saab vastavalt katsevajadustele valida vahemikus 50-55 °C.DNA proovide puhul võib pöördtranskriptsiooni protsessi ära jätta.
2) b.Erijuhtudel saab lõõmutamise/pikendustemperatuuri reguleerida vastavalt praimeri Tm väärtusele, soovitatav on 60°C.
Märkmed
1. See toode on ainult teaduslikuks kasutamiseks.
2. Töötage oma ohutuse tagamiseks laborikittide ja ühekordsete kinnastega.
