Rnaasi inhibiitor (glütseroolivaba)
Hiire RNaasi inhibiitor on rekombinantne hiire RNaasi inhibiitor, mida ekspresseeritakse ja puhastatakse E. colist.See seondub mittekovalentse sideme kaudu RNaasi A, B või C suhtega 1:1, inhibeerides seeläbi kolme ensüümi aktiivsust ja kaitstes RNA-d lagunemise eest.Siiski ei ole see efektiivne Aspergilluse RNaasi 1, RNaasi T1, S1 nukleaasi, RNaasi H või RNaasi vastu.Hiire RNaasi inhibiitorit testiti RT-PCR, RT-qPCR ja IVT mRNA abil ning see ühildus erinevate kaubanduslike pöördtranskriptaaside, DNA polümeraaside ja RNA polümeraasidega.
Võrreldes inimese RNaasi inhibiitoritega ei sisalda hiire RNaasi inhibiitor kaht tsüsteiini, mis on väga tundlikud oksüdatsiooni suhtes, mis põhjustab inhibiitori inaktiveerumist.See muudab selle stabiilseks madalatel DTT kontsentratsioonidel (alla 1 mM).See omadus muudab selle sobivaks kasutamiseks reaktsioonides, kus DTT kõrge kontsentratsioon on reaktsioonile kahjulik (nt reaalajas RT-PCR).
Arakendus
Seda toodet saab laialdaselt kasutada mis tahes katses, kus RNA lagunemise vältimiseks on võimalik RNaasi interferents, näiteks:
1.Esimese ahela cDNA süntees, RT-PCR, RT-qPCR jne;
2.Kaitske RNA-d lagunemise eest in vitro transkriptsioonis/translatsioonis (nt viiruse replikatsioon in vitro);
3. RNaasi aktiivsuse inhibeerimine RNA eraldamise ja puhastamise ajal.
Säilitamistingimused
Hoida temperatuuril -25 ～-15 ℃;
külmutamise-sulatamise tsüklid ≤ 5 korda;
Kehtib 1 aasta.
Ühiku määratlus
Üks ühik on defineeritud kui RNaasi inhibiitori kogus, mis on vajalik 5 ng RNaasi A aktiivsuse 50% inhibeerimiseks.
Molekulmass
RNaasi inhibiitor (glütseroolivaba) on 50 kDa valk.
Kvaliteedi kontroll
Eksonukleaas Tegevus:
40 U ensüümi inkubeerimine 1 μg λ-Hind III lõhutud DNA-ga 16 tundi temperatuuril 37 °C ei andnud geelelektroforeesiga määratud DNA tuvastatavat lagunemist.
Endonukleaasi aktiivsus:
40 U ensüümi inkubeerimine 1 μg λ DNA-ga 16 tundi temperatuuril 37 °C ei andnud geelelektroforeesiga määratud DNA tuvastatavat lagunemist.
Hüüdmine Tegevus:
40 U ensüümi inkubeerimine 1 μg pBR322-ga 16 tundi temperatuuril 37 ℃ ei põhjustanud DNA tuvastatavat lagunemist, mis määrati geelelektroforeesiga.
RNaasi Tegevus:
40 U ensüümi inkubeerimine 1,6 μg MS2 RNA-ga 4 tundi temperatuuril 37 ℃ ei põhjustanud geelelektroforeesiga määratud RNA tuvastatavat lagunemist.
E.coli DNA:
TaqMan qPCR tuvastab 40 U ensüümi.E. coli DNA on ≤ 0,1 pg/40 U.
Ntäheles
1. Ärge raputage ega segage tugevalt, et vältida ensüümide inaktiveerimist.
2. RNaasi inhibiitor on aktiivne temperatuurivahemikus 25 ℃ kuni 55 ℃ ja inaktiveeritakse temperatuuril ≥ 65 ℃.
3. RNaasi H, RNaasi 1 ja RNaasi T1 aktiivsus ei ole inhibeeritud.
4. RNaasi aktiivsuse inhibeerimise pH vahemik on lai (aktiivne pH 5-9 juures), maksimaalne aktiivsus on pH 7-8.
