Temperatuuritundlik UNG
Temperatuuritundlik UNG (TS-UNG) on saadud rekombinantse ekspressiooni teel E. coli's.Ensüüm katalüüsib vaba uratsiili vabanemist uratsiili sisaldavast ühe- ja kaheahelalisest DNA-st ning on RNA suhtes inaktiivne.Võrreldes tavapärase E. coli geeni päritolu UNG ensüümiga on TS-UNG ensüümil kõrgem aktiivsus madalatel temperatuuridel (20 ℃ ~ 37 ℃) ning see on temperatuuritundlik ja kergesti inaktiveeritav (50 ℃), vältides dUTP-d sisaldava amplifikatsiooni lagunemist. tooteid toatemperatuuril jääkaktiivsuse järgi, mis võib jääda pärast tavapärase UNG ensüümi inaktiveerimist.Seetõttu ei sobi TS-UNG ensüüm mitte ainult PCR-i saastumise vältimise reaktsiooniks, vaid sobib hästi ka RT-PCR amplifikatsiooniprogrammiga ja seda saab kasutada RT-PCR saastumise vältimise reaktsioonis.
Soovitatav rakendus
Saastumise vältimise võimendamine
Ladustamise seisukord
-20°C pikaajaliseks säilitamiseks, tuleb enne kasutamist korralikult läbi segada, vältida sagedast külmutamist-sulatamist.
Salvestuspuhver
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilisaator, 50% glütserool.
Ühiku määratlus
Ensüümi kogus, mis on vajalik 1 µg dU-aluseid sisaldava üheahelalise DNA lagundamiseks 1 tunni jooksul temperatuuril 37 °C, on 1 aktiivsusühik (U).
Kvaliteedi kontroll
1.SDS-PAGE elektroforeetiline puhtus üle 98%
2.Lagunemisaktiivsus, partiidevaheline kontroll, stabiilsus
3.Puudub eksogeenne nukleaasi aktiivsus, eksogeense endonukleaasi või eksonukleaasi saastumine.
Juhised
| Komponendid | Maht (μL) | Lõplik kontsentratsioon |
| 10 × PCR puhver (dNTP-vaba, Mg²+tasuta) | 5 | 1× |
| dUTP-d (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (asenda dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1–0,5) | 0,5 U (0,1–0,5 U) |
| 25 × krunt segua | 2 | 1× |
| Mall | - | ＜1μg/reaktsioon |
| ddH₂O | 50-ni | - |
Märkus: a: Kui seda kasutatakse qPCR/qRT-PCR jaoks, tuleb fluorestsentssond lisada reaktsioonisüsteemi.Tavaliselt võib praimeri lõppkontsentratsioon 0,2 μM anda häid tulemusi;kui reaktsioon on halb, saab praimeri kontsentratsiooni reguleerida vahemikus 0,2-1 μM.Tavaliselt on sondi kontsentratsioon optimeeritud vahemikus 0,1–0,3 μM.Praimeri ja sondi parima kombinatsiooni leidmiseks võib läbi viia kontsentratsioonigradiendi katseid.
Märkmed
1.TS-UNG ensüümi optimaalne reaktsioonitemperatuur on suhteliselt madal ja seda saab optimeerida vahemikus 20 ℃ ~ 37 ℃, ensüümi annust ja reaktsiooniaega saab optimeerida vahemikus 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;ja ensüümi saab inaktiveerida pöördtranskriptsiooni protsessis.
2.See sobib saastumise vältimiseks PCR ja RT-PCR jaoks.
3.Vältige sagedast külmutamist-sulatamist ja ärge laske end kokku puutuda suurte temperatuurikõikumistega.
4.Erinevatel amplifitseeritavatel geenidel on erinev dUTP kasutusefektiivsus ja tundlikkus UNG ensüümi suhtes, mistõttu kui UNG süsteemi kasutamine toob kaasa tuvastamise tundlikkuse vähenemise, tuleks reaktsioonisüsteemi reguleerida ja optimeerida, tehnilise toe vajaduse korral võtke ühendust meie firma.
