UDG/UNG ensüümid
UDG (uratsiil-DNA glükosülaas) võib katalüüsida ssDNA-s ja dsDNA-s uratsiilialuse ja suhkru-fosfaatkarkassi vahelise N-glükosiidsideme hüdrolüüsi.See suudab kergesti kontrollida aerosoolsaastet ja sobib tavaliste molekulaarbioloogia süsteemide jaoks, nagu PCR, qPCR, RT-qPCR ja LAMP.
Tehnilised andmed
| Väljenduse host | Rekombinantne E. coli koos uratsiili DNA glükosülaasi geeniga |
| Molekulmass | 24. 8 kDa |
| Puhtus | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Kuumuse inaktiveerimine | 95 ℃, 5-10 min |
| Ühiku määratlus | Üks ühik (U) on defineeritud kui ensüümi kogus, mis on vajalik 1 μg dU-d sisaldava dsDNA hüdrolüüsi katalüüsimiseks 30 minuti jooksul temperatuuril 25 ℃. |
Säilitamine
Toodet tuleb hoida temperatuuril -25℃~-15°C kaks aastat.
Juhised
1.PCR reaktsioonisegu valmistamine järgmise süsteemi järgi
| Komponendid | Maht (μL) | Lõplik kontsentratsioon |
| 10 × PCR puhver (Mg² + pluss) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/leach) | 1 | 0,2 mmol / leostus |
| Malli DNA | X | - |
| Praimer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Praimer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA polümeraas (5 U/μl) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uratsiili DNA glükosülaas (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Kuni 50 | - |
Märge: Vastavalt katsenõuetele saab dUTP lõppkontsentratsiooni reguleerida vahemikus 0,2-0,6 mmol/L ja dTTP-d võib lisada valikuliselt 0,2 mmol/L.
2.Amplifikatsiooni protseduur
| Tsükli samm | Temperatuur | Aeg | Tsüklid |
| dU-d sisaldav malli lagunemine | 25℃ | 10 minutit | 1 |
| UDG aktiveerimine, malli esialgne denatureerimine | 95℃ | 5-10 minutit | 1 |
| Denatureerimine | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Lõõmutamine | 60℃ | 20 sek | |
| Laiendus | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Lõplik pikendus | 72℃ | 5 min | 1 |
Märge: Reaktsiooniaega 25 °C juures saab reguleerida 5-10 minuti jooksul vastavalt katsenõuetele.
Märkmed
1.UDG on aktiivne enamikes PCR reaktsioonipuhvrites.
2.Ensüüme tuleb hoida jääkastis või jäävannil, kui seda kasutatakse, ning kohe pärast kasutamist –20°C juures.
3.Palun kandke oma tervise ja ohutuse tagamiseks vajalikke isikukaitsevahendeid, näiteks laborikittlit ja kindaid!
