Superstart qPCR Premix plus-UNG
Kassi nr: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG on spetsiaalselt lüofiliseerimisprotsesside jaoks välja töötatud spetsiaalne reagent, mis on loodud reaalajas PCR kvalitatiivseteks ja kvantitatiivseteks reaktsioonideks, kasutades sondipõhist tuvastamist.See sisaldab uudset kuumkäivitusensüümi Hotstart Taq plus (DG), mille Taq ensüümi aktiivsus on suletud toatemperatuuril, mis inhibeerib tõhusalt praimeri mittespetsiifilise anniilimise või praimeri dimeeri moodustumise põhjustatud mittespetsiifilist amplifikatsiooni madalatel temperatuuridel, parandades seega amplifikatsioonireaktsiooni spetsiifilisus.See reaktiiv kasutab optimeeritud qPCR-spetsiifilist puhvrit ja UNG/dUTP saastevastast süsteemi, et saavutada kiire kuumkäivitus, mis parandab oluliselt qPCR-reaktsioonide tõhusust ja tundlikkust.See võib saada häid standardkõveraid paljudes kvantitatiivsetes piirkondades ja teostada kvantifitseerimist täpselt, vältides tõhusalt valepositiivse amplifikatsiooni, mis on põhjustatud jääk-PCR-produktidest või aerosoolsaastest.See reaktiiv ühildub enamiku fluorestseeruvate kvantitatiivsete PCR-seadmetega sellistelt tootjatelt nagu Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ja Roche jne ning sellel on hea stabiilsus lüofiliseeritud kujul.
Reaktiivi koostis
1. 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+tasuta) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lüoprotektor (valikuline)
Säilitamistingimused
Pikaajaline ladustamine -20 ℃;võib säilitada temperatuuril 4 ℃ kuni 3 kuud.Enne kasutamist segage hoolikalt javältige korduvat külmutamist ja sulatamist.
Jalgrattasõidu protokoll
| Menetlus | Temp. | Aeg | Tsükkel |
| Seedimine | 50℃ | 2 min | 1 |
| Polümeraasi aktiveerimine | 95℃ | 1-5 min | 1 |
| Denatureerimine | 95℃ | 10-20 s | 40-50 |
| Lõõmutamine ja pikendamine | 56-64 ℃ | 20-60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Syvarre ettevalmistamine
|
Koosseis |
25 µL maht |
50 µl maht |
Lõplik kontsentratsioon |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG(Mg2+tasuta) (DG) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl | 0,9 µl | 4,5 mM |
| 4 × lüoprotektor1 | 6,25 µl | 12,5 µL | 1× |
| 25 × krunt-sondi segu2 | 1 µL | 2 µL | 1× |
| Malli DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25 µL-ni | 50 µL-ni | —— |
1. Praimerite lõppkontsentratsioon 0,2 μM annab tavaliselt häid tulemusi;kui reaktsioon on halb, reguleerige praimeri kontsentratsiooni vastavalt vajadusele vahemikus 0,2–1 μM.Sondi kontsentratsioon optimeeritakse tavaliselt vahemikus 0,1–0,3 μM optimaalsete kombinatsioonide leidmiseks gradientkatsete abil.
2. Erinevat tüüpi mallides sisalduvate sihtgeenide koopiate arv varieerub;vajadusel võib optimaalse matriitsi lisamise koguse määramiseks läbi viia gradientlahjenduse.
3. Seda süsteemi saab lüofiliseerida;kui kliendid kasutavad seda süsteemi ilma külmkuivatusnõueteta, võib valikuliselt lisada 4-kordset lüoprotektorit; kui on vaja külmkuivatatud tooteid, peab vedelate reaktiivide etapis toote toimivuse kontrollimise ajal lisama 4-kordset lüoprotektorit, et tagada kooskõla lüofiliseeritud süsteemi komponentidega. ja efektid.
Kui süsteem on kasutuseld külmkuivatamiseks valmistage ette süsteem as järgnev:
| Koosseis | 25µL Reaktsioonisüsteem |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+tasuta) (DG) | 5 µL |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl |
| 4 × lüoprotektor | 6,25 µl |
| 25 × krunt-sondi segu | 1 µL |
| ddH2O | 18-20 µL-ni |
* Kui külmkuivatamiseks on vaja muid süsteeme, konsulteerige eraldi.
Lüofiliseerimise protsessss
| Menetlus | Temp. | Aeg | Seisund | Surve |
| Eelkülmutamine | 4℃ | 30 min | Hoia |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Jahutus | ||
| -50 ℃ | 180 min | Hoia | ||
| Esmane kuivatamine | -30 ℃ | 60 min | Küte |
Ülim vaakum |
| -30 ℃ | 70 min | Hoia | ||
| Sekundaarne kuivatamine | 25℃ | 60 min | Küte |
Ülim vaakum |
| 25℃ | 300 min | Hoia |
2. Ülaltoodud lüofiliseerimisprotsess on ainult viitamiseks.Erinevatel tootetüüpidel ja erinevatel külmkuivatitel on erinevad parameetrid, nii et neid saab kohandada vastavalt tegelikeletingimused kasutamise ajal.
3. Erineva suurusega lüofiliseeritud partiide jaoks võivad sobida erinevad lüofiliseerimisprotsessidtooteid, seega tuleb suuremahulise tootmise puhul läbi viia piisav testimise valideerimine.
Lüofiliseerimise kasutusjuhendd pulber
1. Tsentrifuugige lühidalt lüofiliseeritud pulbrit;
2. Lisage lüofiliseeritud pulbrile nukleiinhappematriits ja lisage vett kuni 25 µL;
3. Segage hästi tsentrifuugimisega ja käivitage masinal.
Kvaliteedi kontroll:
1. Funktsionaalne testimine: qPCR tundlikkus, spetsiifilisus, reprodutseeritavus.
2. Puudub eksogeenne nukleaasi aktiivsus, eksogeenne endo/eksonukleaasi saastumine.
Tehniline informatsioon:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG kasutab uudset kuumkäivitusensüümi, mis võimaldab kiiret kuumkäivitust 1–5 minuti jooksul;tänu spetsiaalsele puhverpreparaadile sobib see mitmekordseks fluorestsents-kvantitatiivseks PCR-reaktsiooniks.
2. Sellel on kõrgem spetsiifilisus, mis parandab märkimisväärselt fluorestsentsi kvantitatiivse PCR-i piiri tuvastamise tundlikkust, normaliseerides amplifikatsioonikõveraid, saavutades fluorestsentsi väärtuse ilmse paranemise madala kontsentratsiooniga mallidel, mis sobivad kõrge tundlikkusega fluorestsents-kvantitatiivse PCR tuvastamise reaktiividena.
3. Madalama anniilimistemperatuuriga või pikemate kui 200 bp fragmentidega praimerite puhul on soovitatav kasutada kolmeastmelist meetodit.
4. dUTP kasutusefektiivsus ja tundlikkus UNG ensüümi suhtes on erinevate sihtgeenide puhul erinevad, seega kui UNG süsteemi kasutamine viib tuvastamise tundlikkuse vähenemiseni, tuleks reaktsioonisüsteemi reguleerida ja optimeerida.Kui vajate tehnilist tuge, võtke ühendust meie ettevõttega.
5. Kasutage selleks ette nähtud piirkondi ja pipette enne ja pärast võimendamist, kandke töötamise ajal kindaid ja vahetage neid sageli;ärge avage reaktsioonitoru pärast PCR-i lõpetamist, et minimeerida proovide saastumist PCR-produktidega.
