RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
See toode sisaldab reaktsioonipuhvrit, RT-Enzymes Mix (Bst DNA polümeraas ja kuumuskindel pöördtranskriptaas), lüofiliseeritud kaitsvaid aineid ja kromogeenseid värvaineid.Kasutamiseks kasutage lihtsalt puhvrit, reaktsiooniensüüm ja praimer segatakse ning lisatakse mallile;lüofiliseeritud kaitsevahendi lisamine võib olla sirge.See ühendati lüofilisaatoriga ja lüofiliseeriti ning kasutamisel lisati ainult praimerid ja mallid.See komplekt võimaldab kiiret ja selget visuaalset amplifikatsiooni tuvastamist, milline negatiivne reaktsioon on tähistatud punasega ja positiivne reaktsioon on tähistatud kollaseks muutumisega.
Komponent
| Komponent | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Loop-vahendatud võimenduspuhver (koos värvainega) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| RT-ensüümide segu | 270 µl | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Lüofiliseeritud kaitsevahend | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Rakendused
DNA või RNA isotermiliseks amplifikatsiooniks.
Säilitamistingimused
Transporditakse kuiva jääga, hoitakse temperatuuril -25 ~ -15 ℃.Vältige sagedast külmutamist-sulatamist, toode kehtib 12 kuud.
Protokoll
1.Sulatage kasutatav reaktsioonipuhver toatemperatuuril.Pööristage korraks või pöörake katsuteid mitu korda ümber, et neid põhjalikult segada, seejärel tsentrifuugige, et koguda vedelik katsuti põhja.
2.Reaktsioonisüsteemi ettevalmistamine.Seda reagenti saab valmistada kahes reaktsioonisüsteemis, vedelas reaktsioonisegus ja lüofiliseeritud süsteemisegus.
1) Valmistage ette vedel reaktsioonisegu
| Komponent | Helitugevus |
| Loop-vahendatud võimenduspuhver (koos värvainega) | 10 μL |
| RT-ensüümide segu | 2,8 μL |
| 10 × krunt segua | 5 μL |
| DNA/RNA mallid b | × μL |
| Tuumavaba vesi | Kuni 50 μL |
2) Lüofiliseerimissüsteemi segu
① Valmistage ette lüofiliseeritud segu
| Komponent | Helitugevus |
| Loop-vahendatud võimenduspuhver (koos värvainega) | 10 μL |
| Lüofiliseeritud kaitsevahend | 20 μL |
| RT-ensüümide segu | 2,8 μL |
| Tuumavaba vesi | Kuni 50 μL |
② Lüofiliseerimine: valmistatud segu lüofiliseeriti 50 µl süsteemis
③ Valmistage reaktsioonisegu
| Komponent | Helitugevus |
| Lüofiliseeritud segu | 1 tükk |
| 10 × krunt segua | 5 μL |
| DNA/RNA mallid b | × μL |
| Tuumavaba vesi | Kuni 50 μL |
Märkused:
1) a.10 × praimeri segu: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (vees lahustuv) on soovitatav nukleiinhapete templi jaoks.
1.Inkubeerida 65°C juures 30-45 minutit, mida saab vastavalt värvimuutusele vastavalt pikendada. Reaktsiooniaeg.
2.Palja silma järgi oli kollane positiivne ja punane negatiivne.
Märkmed
1.Puhvertoru põhja võib ilmuda soola, segage korraks või pöörake torusid mitu korda ümber, et toatemperatuuril põhjalikult seguneda.
2.Reaktsiooni temperatuuri saab optimeerida vahemikus 62 ℃ kuni 68 ℃ vastavalt praimerite seisukorrale.
3.Pakendatud reaktiive ei tohi pikka aega õhu käes hoida.
4.Punase ja kollase värvuse muutumise reaktsioon sõltub reaktsioonisüsteemi pH muutusest, palun ärge kasutage Tris nukleiinhappe säilituslahust, soovitatav kasutada ddH2O salvestatud nukleiinhape;
5.Katse tuleks standardiseerida, sealhulgas reaktsioonisüsteemi ettevalmistamine, lüofiliseerimine ning proovide töötlemine ja proovide lisamise protsess;
6.Saastumise vältimiseks on soovitatav reaktsioonisüsteem ette valmistada ülipuhtal pingil, teistes Lisage valepositiivsete häirete vältimiseks ruumi tõmbekapile mallid.
