Rnase A
Ribonukleaas A (RNaseA) on üheahelaline polüpeptiid, mis sisaldab 4 disulfiidsidet molekulmassiga umbes 13,7 kDa.RNaas A on endoribonukleaas, mis lagundab spetsiifiliselt üheahelalist RNA-d C- ja U-jääkide juures.Täpsemalt, lõhustamine tunneb ära fosfodiestersideme, mis on moodustatud nukleotiidi 5'-riboosist ja külgneva pürimidiini nukleotiidi 3'-riboosil olevast fosfaatrühmast, nii et 2, 3'-tsüklilised fosfaadid hüdrolüüsitakse vastavateks33-ks. ′nukleosiidfosfaadid (nt pG-pG-pC-pA-pG lõhustatakse RNaas A poolt, et tekitada pG-pG-pCp ja A-PG).RNaas A on kõige aktiivsem üheahelalise RNA lõikamisel.Soovitatav töökontsentratsioon on 1-100 μG/mL, mis sobib erinevate reaktsioonisüsteemidega.Madalat soolakontsentratsiooni (0-100 mM NaCl) saab kasutada üheahelalise RNA, kaheahelalise RNA ja RNA-DNA hübridisatsioonil tekkinud RNA ahelate lõikamiseks.Kuid kõrge soolakontsentratsiooni korral (≥0,3 M) lõikab RNaas A spetsiifiliselt ainult üheahelalist RNA-d.
RNaas A kasutatakse kõige sagedamini RNA eemaldamiseks plasmiidse DNA või genoomse DNA valmistamise ajal. Olenemata sellest, kas DNaas on ettevalmistusprotsessi ajal aktiivne või mitte, võib reaktsiooni kergesti mõjutada.Traditsioonilist veevannis keetmise meetodit saab kasutada DNaasi aktiivsuse inaktiveerimiseks.See toode ei sisalda DNaasi ja proteaasi ning ei vaja enne kasutamist kuumtöötlust.Lisaks saab seda toodet kasutada ka molekulaarbioloogilistes katsetes, nagu RNaasi kaitseanalüüs ja RNA järjestuse analüüs.
Säilitamistingimused
Toodet võib säilitada temperatuuril -25～-15 ℃, kehtivusaeg 2 aastat.
Juhised
See on üks levinumaid meetodeid RNaas A säilituslahuse valmistamiseks.Seda saab valmistada kamuud meetodid vastavalt traditsioonilistele labori- või teatmekirjanduse meetoditele (ntlahustub vahetult 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 või Tris-NaCl lahuses)
1. Kasutage 10 mg/ml RNaasi A säilituslahuse valmistamiseks 10 mM naatriumatsetaati (pH 5,2).
2. Kuumutamine 100 ℃ juures 15 min
3. Jahutage toatemperatuurini, lisage 1/10 mahust 1 M Tris-HCl (pH 7,4), reguleerige selle pH väärtusele 7,4 (eestNäiteks lisage 500 ml 10 g/ml RNaasi säilituslahust 1 M Tris-HCL, PH7,4)
4. Alampakendatud temperatuuril -20 ℃ külmutatud säilitamiseks, mis võib olla stabiilne kuni 2 aastat.
[Märkused]: RNaasA lahuse keetmisel neutraalsetes tingimustes moodustub RNaasi sade;Keeda seda madalama pH juures ja kui on sademeid, võib seda täheldada, mis võib olla põhjustatud valgulisandite olemasolust.Kui pärast keetmist leitakse setet, saab lisandeid eemaldada suure kiirusega tsentrifuugimisega (13 000 pööret minutis) ja seejärel pakendada külmutamiseks.
Tooteteave
| Sünonüümid | ribonukleaas I;Pankrease ribonukleaas;ribonukleaas 3'-pürimidnooligonukleotidohüdrolaas;Rnase A;Endoribobultseaas I |
| CAS nr. | 9001-99-4 |
| Välimus | Valge lüofiliseeritud pulber |
| Molekulmass | ~ 13,7 kDa (aminohappejärjestus) |
| Ph väärtus | 7,6 (aktiivsusvahemik 6–10) |
| Sobiv temperatuur | 60 ℃ (aktiivsusvahemik 15-70 ℃) |
| Aktiveeriv aine | Na2+.K+ |
| Inhibiitor | Rnaasi inhibiitor |
| Inaktiveerimise meetod | Ei saa inaktiveerida kuumutamisel, soovitatakse kasutada tsentrifuugikolonni |
| Päritolu | Veised |
| Lahustuvus | Vees lahustuv (10mg/ml) |
| Kadu kuivamisel | ≤5,0% |
| Ensüümide aktiivsus | ≥60 Kunitzi ühikut/mg |
| Isoelektriline punkt | 9.6 |
Märkmed
Oma ohutuse ja tervise huvides kandke töötamiseks laborikitlit ja ühekordseid kindaid.
