Multiplex qPCR Probe Premix
Kassi nr: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (värvipõhine) on eellahus 2-kordseks reaalajas kvantitatiivseks PCR võimendamiseks, mida iseloomustab kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus, mis on sinist värvi ja millel on proovi lisamise efekt.See toode on 2× Mix eelsegatud reagent, mis võimaldab ühes reaktsioonisüvendis kuni neli fluorestseeruvat kvantitatiivset PCR reaktsiooni.See toode sisaldab geneetiliselt muundatud antikeha meetodit Taq ensüümi kuumkäivitamiseks, mis parandab oluliselt amplifikatsiooni tundlikkust ja spetsiifilisust.Samal ajal on see toode sügavalt optimeerinud mitme reaktsiooni puhvrit, mis võib parandada reaktsiooni võimendamise efektiivsust ja soodustada madala kontsentratsiooniga mallide tõhusat võimendamist.Seda toodet saab kasutada genotüpiseerimiseks ja mitmekordseks kvantitatiivseks analüüsiks.
Spetsifikatsioon
| Kuum algus | Sisseehitatud kuumkäivitus |
| Tuvastamismeetod | Praimer-sondi tuvastamine |
| PCR meetod | qPCR |
| Polümeraas | Taq DNA polümeraas |
| Proovi tüüp | DNA |
Säilitamistingimused
Toode tarnitakse kuiva jääga ja seda saab hoida temperatuuril -25-15 ℃ 2 aastat.
Juhised
1. ReaktsioonSüsteem
| Komponendid | Maht (μL) | Lõplik kontsentratsioon |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Praimeri segu (10 μmol/L) a | × | 0,1-0,5 μmol/L |
| Sondi segu (10 μmol/L)b | × | 50-250 nmol/L |
| Roxi võrdlusvärv | 0.5 | 1× |
| Malli DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | kuni 25 | - |
Märkused:Enne kasutamist segage hoolikalt, et vältida tugevast raputamisest tulenevaid liigseid mullid.
a.Praimeri kontsentratsioon: Primer Mix sisaldab mitut paari praimereid, tavaliselt iga praimer lõppkontsentratsiooniga 0,2 μmol/L ja seda saab vastavalt vajadusele reguleerida ka vahemikus 0,1 kuni 0,5 μmol/L.
b.Sondi kontsentratsioon: Probe Mix sisaldab mitut erineva fluorestsentssignaaliga sondi ja iga sondi kontsentratsiooni saab vastavalt konkreetsele olukorrale reguleerida vahemikus 50 kuni 250 nmol/L.
1.Rox-värvi viide: seda kasutatakse reaalajas PCR-i võimendusseadmetes, nagu Applied Biosystems, et parandada süvendite vahel genereeritud fluorestsentssignaali viga;see toode ei sisalda Roxi värvi viidet.Vajadusel on soovitatav kasutada Cas#10200.
2.Malli lahjendamine: qPCR on väga tundlik ja selle kasutamiseks on soovitatav malli lahjendada.Kui matriitsiks on cDNA põhilahus, ei tohiks matriitsi maht ületada 1/10 kogumahust.
3.Reaktsioonisüsteem: sihtgeeni amplifikatsiooni efektiivsuse ja korratavuse tagamiseks on soovitatav kasutada 25 μL, 30 μL või 50 μL.
4.Süsteemi ettevalmistamine: valmistuge ülipuhtal töölaual ning kasutage otsikuid ja reaktsioonitorusid ilma nukleaasijääkideta;otsikuid on soovitatav kasutada filtrikassettidega.Vältige ristsaastumist ja aerosooliga saastumist.
2.Reaktsiooniprogramm
| Tsükli samm | Temp. | Aeg | Tsüklid |
| Esialgne-denatureerimine | 95 ℃ | 5 minutit | 1 |
| Denatureerimine | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Lõõmutamine/pikendus | 60 ℃ | 30 sek |
Märkused:
1.Lõõmutamine/pikendamine: temperatuuri ja aega saab vastavalt krundi kavandatud Tm väärtusele vastavalt reguleerida.
2.Fluorestsentssignaali hankimine: erinevate qPCR-i tuvastamise instrumentide jaoks vajalik fluorestsentssignaali hankimise aeg on erinev, palun määrake vastavalt minimaalsele ajalimiidile.Mitme levinud instrumendi aeg määratakse järgmiselt:
20 sek: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Applied Biosystems 7300
32 sek: Applied Biosystems 7500
Märkmed
Palun kandke oma tervise ja ohutuse tagamiseks vajalikke isikukaitsevahendeid, näiteks laborikittlit ja kindaid!
