Bst 2.0 DNA polümeraas (glütseroolivaba, suure tihedusega)
Bst DNA polümeraas V2 pärineb Bacillus stearothermophilus DNA polümeraasist I, millel on 5′→3′ DNA polümeraasi aktiivsus ja tugev ahela asendusaktiivsus, kuid puudub 5′→3′ eksonukleaasi aktiivsus.Bst DNA polümeraas V2 sobib ideaalselt ahela nihutamiseks, isotermiliseks amplifikatsiooniks LAMP (loop mediated isothermal amplification) ja kiireks sekveneerimiseks.See Bst DNA polümeraas V2 on võimeline inhibeerima DNA polümeraasi aktiivsust toatemperatuuril, nii et seda saab kasutada ja reaktsioonisüsteemi saab koostada toatemperatuuril, vältides mittespetsiifilist amplifikatsiooni ja parandades reaktsiooni efektiivsust. lüofiliseerida.Lisaks on see võimeline vabastama oma aktiivsust kõrgendatud temperatuuridel, välistades seega vajaduse eraldi aktiveerimisetapi järele.
Komponendid
| Komponent | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
| Bst DNA polümeraas V2 (glütseroolivaba) (32U/μL) | 0,05 ml | 0,25 ml | 2,5 ml |
| 10 × HC Bst V2 puhver | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Rakendused
1.LAMP isotermiline võimendus
2.DNA ahela ühe nihke reaktsioon
3.Kõrge GC geenijärjestus
4.DNA järjestuse määramine nanogrammi tasemel.
Ladustamise seisukord
Transportida temperatuuril alla 0°C ja hoida temperatuuril -25°C~-15°C.
Ühiku määratlus
Üks ühik on defineeritud kui ensüümi kogus, mis lisab 25 nmol dNTP-d happes lahustumatusse ainesse 30 minuti jooksul temperatuuril 65 °C.
LAMP Reaktsioon
| Komponendid | 25 μLSüsteem |
| 10 × HC Bst V2 puhver | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP-d (igaüks 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 roheline (25×)a | 1,0 μL |
| Praimeri segub | 6 μL |
| Bst DNA polümeraas V2 (glütseroolivaba) (32 U/uL) | 0,25 µl |
| Mall | × μL |
| ddH₂O | Kuni 25 μL |
Märkused:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Vastavalt eksperimentaalsele vajadusele võib asendusainetena kasutada ka teisi värvaineid;
2) b.Praimeri segu: saadakse 20 uM FIP, 20 uM BIP, 2,5 uM F3, 2,5 uM B3, 5 uM LF, 5 uM LB ja muude mahtude segamisel.
Reaktsioon ja seisund
1 × HC Bst V2 puhvriga, inkubatsioonitemperatuur on vahemikus 60 °C kuni 65 °C.
Kuumuse inaktiveerimine
80°C, 20 min.
