BspQI
BspQI saab rekombinantselt ekspresseerida E. coli-s, mis tunneb ära spetsiifilised saidid ja mida toodetakse all
BspQI, IIs restriktsiooni endonukleaasi restriktsiooniendonukleaas, pärineb rekombinantsest E. coli tüvest, mis kannab Bacillus sphaericus'e kloonitud ja modifitseeritud BspQI geeni.See suudab ära tunda konkreetsed saidid ning äratundmisjärjestus ja lõhustamiskohad on järgmised:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Toote omadused
1. Kõrge aktiivsus, Kiire seedimine;
2. Madal täheaktiivsus, mis tagab täpse lõikamise nagu “skalpell”;
3. BSA-ta ja loomse päritoluga vaba;
Metüülimise tundlikkus
Dolen metüülimine:Pole tundlik;
Dcm metüülimine:Pole tundlik;
CpG metüülimine:Pole tundlik;
Säilitustingimused
Toode tuleb tarnida temperatuuril ≤ 0 ℃;Hoida temperatuuril -25-15 ℃.
Salvestuspuhver
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitool, 500 ug/ml rekombinantset albumiini, 0,1% Trition X-100 ja 50% glütserooli (pH 7,0 25 °C juures).
Ühiku määratlus
Üks ühik on defineeritud kui ensüümi kogus, mis on vajalik 1 µg sisemise kontroll-DNA seedimiseks 1 tunni jooksul temperatuuril 50 °C reaktsiooni kogumahus 50 µl.
Kvaliteedi kontroll
Valgu puhtuse test (SDS-PAGE):BspQI puhtus määrati SDS-PAGE analüüsiga ≥95%.
RNaas:10 U BspQI koos 1,6 μg MS2 RNA-ga 4 tunni jooksul temperatuuril 50 ℃ ei põhjusta agaroosgeelelektroforeesiga määratud lagunemist.
Mittespetsiifiline DNA aktiivsus:10 U BspQI koos 1 μg λ DNA-ga temperatuuril 50 ℃ 16 tundi, võrreldes 50 ℃ 1 tunniga, ei anna agaroosgeelelektroforeesil kindlaksmääratud DNA-d liigset.
Ligeerimine ja ümberlõikamine:Pärast 1 μg λDNA lõhustamist 10U BspQI-ga saab DNA fragmente ligeerida T4 DNA ligaasiga temperatuuril 16 °C.Ja neid ligeeritud fragmente saab BspQI-ga uuesti lõigata.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-spetsiifiline TaqMan qPCR tuvastamine näitas, et E. coli genoomi jääk oli ≤ 0,1 pg/ul.
Peremeesvalgu jääk:≤ 50 ppm
Bakteriaalne Endotoksiin: LAL-test, vastavalt Hiina farmakopöa IV 2020. aasta väljaandele, geelipiiri katsemeetod, üldreegel (1143).Bakterite endotoksiinide sisaldus peaks olema ≤10 EU/mg.
Reaktsioonisüsteem ja tingimused
| Komponent | Helitugevus |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I puhver | 5 μL |
| dd H2O | Kuni 50 μL |
Reaktsioonitingimused: 50 ℃, 1-16 h.
Kuumuse inaktiveerimine: 80°C 20 min.
Soovitatav reaktsioonisüsteem ja tingimused võivad anda suhteliselt hea ensüümi seedimise efekti, mis on ainult viitamiseks. Üksikasju vaadake katsetulemustest.
Toote rakendus
Restriktsioon endonukleaasi seedimine, kiire kloonimine.
Märkmed
1. Ensüümi maht ≤ 1/10 reaktsiooni mahust.
2. Tähtede aktiivsus võib ilmneda, kui glütserooli kontsentratsioon on üle 5%.
3. Lõhustumisaktiivsus võib ilmneda, kui substraat on alla soovitatud suhte.
