2 × HiF Taq pluss Master Mix
Kassi nr: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (värviga) on kasutusvalmis 2× eelsegatud lahus, mis sisaldab Plus HIF DNA polümeraasi, dNTP-sid ja optimeeritud puhvrit.Põhisegule lisatakse kaks toatemperatuuril monoklonaalset antikeha, mis inhibeerivad polümeraasi aktiivsust ja 3′→5′ eksonukleaasi aktiivsust, et võimaldada lihtsalt ja väga spetsiifilist Hot Start PCR-i.Laiendusfaktor lisatakse põhisegule, et anda ensüümile pika fragmendi võimendusvõime, amplifikatsiooni pikkus võib olla kuni 13 kb, ensüümil on 5′→3′ DNA polümeraasi aktiivsus ja 3′→5′. eksonukleaasi aktiivsus, selle täpsus on 83 korda suurem kui Taq DNA polümeraasil, mis on 9 korda suurem kui tavalisel DNA polümeraasil.See sobib keerukate mallide võimendamiseks, võimendusprodukt on nüri ots.
2×HIF Taq pluss Master Mix (värviga) eeliseks on kiire ja lihtne, kõrge tundlikkus, tugev spetsiifilisus, hea stabiilsus jne, reaktsioonisüsteemile tuleb lisada ainult praimereid ja malle ning seda saab võimendada kahe sammuprotokoll, mis lihtsustab katseetappe ja säästab aega.See toode sisaldab elektroforeesi indikaatorvärve ja PCR tooteid saab kasutada otse elektroforeesiks.Lisaks sisaldab toode ka spetsiifilist kaitseainet, et põhisegu saaks pärast korduvat külmutamist-sulatamist säilitada stabiilse aktiivsuse.
Säilitamistingimused
Tooteid tuleks hoida temperatuuril -25-15 ℃ 1 aasta.
Tehnilised andmed
Toote spetsifikatsioon | Master Mix |
Keskendumine | 2× |
Kuum algus | Sisseehitatud kuumkäivitus |
Üleulatuvus | Nüri |
Reaktsiooni kiirus | Kiire |
Suurus (lõpptoode) | Kuni 13 kb |
Transpordi tingimused | Kuiv jää |
Toote tüüp | Kõrge täpsusega PCR eelsegud |
Juhised
1.PCR reaktsioonisüsteem
Komponendid | Maht (μL) |
DNA mall | Sobivad |
Edasine praimer (10 μmol/L) | 2.5 |
Pöördpraimer (10 μmol/L) | 2.5 |
2 × HIF Taq pluss Master Mix | 25 |
ddH2O | kuni 50 |
2.Soovitatav erinevate mallide kasutamine
Malli tüüp | Amplifitseerige fragmente vahemikus 1 kb kuni 10 kb |
Genoomne DNA | 50 ng-200 ng |
Plasmiidne või viiruse DNA | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2,5 µL (mitte üle 10% PCR reaktsiooni lõppmahust) |
3.Võimendusprotokoll
1) Kaheastmeline protokoll (keerukuse mall)
Tsükli samm | Temp. | Aeg | Tsüklid |
Esialgne denaturatsioon | 98℃ | 3 min | 1 |
Denatureerimine | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
Laiendus | 68℃ | 30 sek/kb | |
Lõplik pikendus | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Kolmeastmeline protokoll (tavaline protokoll)
Tsükli samm | Temp. | Aeg | Tsüklid |
Esialgne denaturatsioon | 98℃ | 3 min | 1 |
Denatureerimine | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
Lõõmutamine | 60℃ | 20 sek | |
Laiendus | 72℃ | 30 sek/kb | |
Lõplik pikendus | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Lõõmutamise gradiendi protokoll (keerukuse mall)
Tsükli samm | Temperatuur | Aeg | Tsüklid |
Esialgne denaturatsioon | 98℃ | 3 min | 1 |
Denatureerimine | 98℃ | 10 sek | 15 (1 ℃ vähendamine tsükli kohta) |
Gradientlõõmutamine | 70-55 ℃ | 20 sek | |
Laiendus | 72℃ | 30 sek/kb | |
Denatureerimine | 98℃ | 10 sek |
20 |
Lõõmutamine | 55℃ | 20 sek | |
Laiendus | 72℃ | 30 sek/kb | |
Lõplik pikendus | 72℃ | 5 min | 1 |
Funktsioonid erineva võimendusprotokolli all
Protocol | Kaheastmeline | Kolmeastmeline | Gradientlõõmutamine |
Spec. | kiire | keskmine | aeglane |
Spetsiifilisus | kõrge | keskmine | kõrge |
PCR saagis | keskmine | kõrge | keskmine |
Avastamise määr | kõrge | keskmine | kõrge |
Märkmed
Palun kandke oma tervise ja ohutuse tagamiseks vajalikke isikukaitsevahendeid, näiteks laborikittlit ja kindaid!