Ultra Nuclease
UltraNuclease on geneetiliselt muundatud endonukleaas, mis on saadud Serratia marcescens'ist, mis on võimeline lagundama DNA või RNA, kas kahe- või üheahelalise, lineaarse või ringikujulise mitmesugustes tingimustes, lagundama nukleiinhapped täielikult 5'-monofosfaatoligonukleotiidideks pikkusega 3–5 baasi. .Pärast geenitehnoloogia modifitseerimist fermenteeriti, ekspresseeriti ja puhastati toodet Escherichia colis (E. coli), mis vähendab raku supernatandi ja rakulüsaadi teadusliku uurimistöö viskoossust, kuid parandab ka valgu puhastamise efektiivsust ja funktsionaalseid uuringuid.Seda saab kasutada ka geeniteraapias, viiruse puhastamises, vaktsiinide tootmises, valkude ja polüsahhariidide farmaatsiatööstuses peremeesorganismi jääkide nukleiinhappe eemaldamise reagendina.
Toote omadused
| CAS nr. | 9025-65-4 |
| EÜ nr | |
| Molekulmass | 30 kDa |
| Isoelektriline punkt | 6.85 |
| Valgu puhtus | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Konkreetne tegevus | ≥1.1 × 106 U/mg |
| Optimaalne temperatuur | 37°C |
| Optimaalne pH | 8.0 |
| ProteaseActivity | negatiivne |
| Biokoormus | ＜10 CFU/100 000 U |
| Peremeesraku jääkvalk | ≤10 ppm |
| Heavy metal | ≤10 ppm |
| Bakteriaalne endotoksiin | ＜0,25EU/1000U |
| Salvestuspuhver | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glütserool |
Säilitustingimused
≤0°C transportimine；-25~-15°C Säilitamine, 2-aastane kehtivus (vältige külmutamist-sulatamist).
Ühiku määratlus
Ensüümi kogus, mida kasutati △A260 neeldumisväärtuse muutmiseks 1,0 võrra 30 minuti jooksul temperatuuril 37 °C, pH 8,0, mis vastab 37 μg lõhe sperma DNA-le oligonukleotiidideks lõikamise teel, määratleti aktiivse ühikuna (U).
Kvaliteedi kontroll
Peremeesraku jääkvalk: ELISA komplekt
•Proteaas Jäägid: 250 KU/mL UltraNuclease reageeris substraadiga 60 minutit, aktiivsust ei tuvastatud.
•Bakteriaalne endotoksiin: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China, 4. köide (2020. aasta väljaanne) geeli piirmäära katsemeetod.Üldreeglid (1143).
•Biokoormus: Hiina Rahvavabariigi farmakopöa, 4. köide (2020. aasta väljaanne) – Üldine
Steriilsustesti reeglid (1101), HRV riiklik standard, GB 4789.2-2016.
•Heavy metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operatsioon
UltraNuclease aktiivsus inhibeeriti oluliselt, kui SDS või EDTA kontsentratsioon oli üle 0, 1%.
kontsentratsioon oli üle 1 mM. Pindaktiivsed ained Triton X-100, Tween 20 ja Tween 80 ei mõjutanud nukleaasi
omadused, kui kontsentratsioon oli alla 1,5%.
| Operatsioon | Optimaalne toimimine | Kehtiv toiming |
| Temperatuur | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | > 100 mM |
| 2-merkaptoetanool | 0-100 mM | > 100 mM |
| Monovalentne metalliioon (Na+, K+ jne) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Kasutamine ja annustamine
• Eemaldage vaktsiinitoodetest eksogeenne nukleiinhape, vähendage jääknukleiinhappe toksilisuse riski ja parandage toote ohutust.
• Vähendage nukleiinhappest põhjustatud söödavedeliku viskoossust, lühendage töötlemisaega ja suurendage valgu saaki.
• Eemaldage nukleiinhape, mis mähkis osakese (viirus, inklusioonikeha jne), mis soodustab
osakese vabastamiseks ja puhastamiseks.
| Eksperimentaalne tüüp | Valgu tootmine | Viirus, vaktsiin | Rakkude ravimid |
| Lahtrite arv | 1 g raku märgkaal (resuspendeeritud 10 ml puhvriga) | 1L kääritamine vedel supernatant | 1L kultuuri |
| Minimaalne annus | 250U | 100U | 100U |
| Soovitatav annus | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nukleaasiga töötlemine võib parandada kolonnkromatograafia, elektroforeesi ja blotanalüüsi jaoks kasutatava proovi lahutusvõimet ja taastumist.
• Geeniteraapias eemaldatakse nukleiinhape, et saada puhastatud adeno-assotsieerunud viirused.
