Ühesammuline kiire RT-qPCR sondi eelsegu-UNG
Kassi nr: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) on sondil põhinev RT-qPCR kiire tuvastamise komplekt, mis sobib ühe- või multipleksse kvantitatiivse PCR jaoks, kasutades matriitsina RNA-d (nagu RNA viirus).See toode kasutab uue põlvkonna antikehadega modifitseeritud Taq DNA polümeraasi ja üheastmelist spetsiaalset pöördtranskriptaasi koos optimeeritud puhvriga kiireks amplifikatsiooniks, millel on kiirem amplifikatsioonikiirus, suurem amplifikatsiooni efektiivsus ja spetsiifilisus.See toetab madala ja kõrge kontsentratsiooniga proovide tasakaalustatud võimendamist lühikese aja jooksul nii üksik- kui ka multipleksides.
Komponendid
1. 5 × RT-qPCR puhver (U+)
2. Ensüümi segu (U+)
Märkused:
a.5 × RT-qPCR puhver (U+) sisaldab dNTP ja Mg2+;
b.Ensüümi segu (U+) sisaldab pöördtranskriptaasi, Hot Start Taq DNA polümeraasi, RNaasi inhibiitorit ja UDG-d;
c.Kasutage RNaasi-vaba otsikuid, EP torusid jne.
Enne kasutamist segage 5×RT-qPCR puhvrit (U+) põhjalikult.Kui pärast sulatamist tekib sademeid, oodake, kuni puhver soojeneb toatemperatuurini, segage ja lahustub ning seejärel kasutage neid tavapäraselt.
Säilitamistingimused
Toode tarnitakse kuiva jääga ja seda saab säilitada temperatuuril -25-15 ℃ 1 aasta.
Juhised
1. Reaktsioon Süsteem
| Komponendid | Maht (20 μL reaktsioon) |
| 2 × RT-qPCR puhver | 4 μL |
| Ensüümi segu (U+) | 0,8 μL |
| Praimer edasi | 0,1-1,0 μM |
| Primer Reverse | 0,1-1,0 μM |
| TaqMani sond | 0,05-0,25 μM |
| Mall | X μL |
| RNaasivaba vesi | kuni 25 μl |
Märkused: Reaktsiooni maht on 10-50 μL.
2. Jalgrattasõidu protokoll (Stavapärane)
| Tsükkel samm | Temp. | Aeg | Tsüklid |
| Pöördtranskriptsioon | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Esialgne denaturatsioon | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denatureerimine | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
| Lõõmutamine/pikendus | 60 ℃ | 30 sek |
| Jalgrattasõidu protokoll (Kiire) Tsükkel samm |
Temp. |
Aeg |
Tsüklid |
| Pöördtranskriptsioon | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Esialgne denaturatsioon | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denatureerimine | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Lõõmutamine/pikendus | 60 ℃ | 10 s |
Märkused:
a.Pöördtranskriptsiooni temperatuur on vahemikus 50 ℃ kuni 60 ℃, temperatuuri tõstmine aitab võimendada keerulisi struktuure ja kõrge CG-sisaldusega malle;
b.Optimaalset anniilimistemperatuuri tuleb kohandada praimeri Tm väärtuse alusel ja valida reaalajas PCR-instrumendi põhjal fluorestsentssignaali kogumiseks lühim aeg.
Märkmed
Palun kandke oma tervise ja ohutuse tagamiseks vajalikke isikukaitsevahendeid, näiteks laborikittlit ja kindaid!
