Leeliseline fosfataas (ALP)
Kirjeldus
Aluseline fosfataas pärineb rekombinantsest E. coli tüvest, mis kannab TAB5 geeni.Ensüüm katalüüsib DNA ja RNA fosfomonoestrite 5' ja 3' otste defosforüülimist.Samuti hüdrolüüsib see riboosi, aga ka desoksüribonukleosiidtrifosfaate (NTP-sid ja dNTP-sid).TAB5 Leeliseline fosfataas toimib 5" väljaulatuvatele, 5" süvistatud ja tömpidele otstele.Fosfataasi saab kasutada paljudes molekulaarbioloogia rakendustes, nagu kloonimine või sondi otste märgistamine, et eemaldada DNA või RNA fosforüülitud otsad.Kloonimiskatsetes takistab defosforüülimine lineariseeritud plasmiidse DNA iseligeerumist.Samuti võib see lagundada PCR-reaktsioonides inkorporeerimata dNTP-sid, et valmistada DNA sekveneerimiseks matriitsi.Ensüüm inaktiveeritakse täielikult ja pöördumatult kuumutamisel 70 °C juures 5 minutit, mistõttu fosfataasi eemaldamine enne ligeerimist või lõppmärgistamist ei ole vajalik.
Kasutamine
1. Valkudega (antikehad, streptavidiin jne) seotud leeliseline fosfataas suudab spetsiifiliselt tuvastada sihtmolekule ning seda saab kasutada ELISA, WB ja histokeemilise tuvastamise jaoks;
2. Leeliselist fosfataasi saab kasutada DNA või RNA 5'-otsa defosforeerimiseks, et vältida isesidumist;
3. Ülaltoodud defosforüülitud DNA või RNA saab märgistada radioaktiivselt märgistatud fosfaatidega (T4 polünukleotiidkinaasi kaudu)
Keemiline struktuur
Spetsifikatsioon
| Testitavad esemed | Tehnilised andmed |
| Ensüümi aktiivsus | 5U/μL |
| Endonukleaasi aktiivsus | Ei tuvastatud |
| Eksonukleaasi aktiivsus | Ei tuvastatud |
| Hüüdmise tegevus | Ei tuvastatud |
| RNaasi aktiivsus | Ei tuvastatud |
| E. coli DNA | ≤1 koopia/5U |
| Endotoksiin | LAL-test, ≤10EU/mg |
| Puhtus | ≥95% |
Transport ja ladustamine
Transport:AmbIent
Säilitamine:Hoida temperatuuril 2-8°C
Soovitatav kordustestElu:2 aastat
