Peroksidaas (mädarõika allikas) Sünonüüm: Vesinikperoksiidoksidoreduktaas;HRP
Kirjeldus
Mädarõika peroksidaas (HRP) on isoleeritud mädarõika (Amoracia rusticana) juurtest ja kuulub peroksidaaside ferroprotoporfüriini rühma.HRP ühineb kergesti vesinikperoksiidiga (H2O2).Saadud [HRP-H2O2] kompleks võib oksüdeerida mitmesuguseid vesiniku doonoreid:
Doonor + H2O2 → Oksüdeeritud doonor + 2 H2O
HRP oksüdeerib erinevaid substraate (vt tabel 1):
• Kromogeenne
• Kemiluminestseeruv (nagu luminool või isoluminool)
• Fluorogeensed (nagu türamiin, homovanillhape või 4-hüdroksüfenüüläädikhape)
HRP on üheahelaline polüpeptiid, mis sisaldab nelja disulfiidsilda.HRP on glükoproteiin, mis sisaldab 18% süsivesikuid.Süsivesikute koostis koosneb galaktoosist, arabinoosist, ksüloosist, fukoosist, mannoosist, mannosamiinist ja galaktoosamiinist, olenevalt konkreetsest isosüümist.
HRP on laialdaselt kasutatav immunoglobuliinide märgis paljudes erinevates immunokeemiarakendustes, sealhulgas immunoblotanalüüsis, immunohistokeemias ja ELISA-s.HRP-d saab konjugeerida antikehadega mitme erineva meetodi abil, sealhulgas glutaaraldehüüdi, perjodaadi oksüdatsiooni, disulfiidsidemete ning ka amino- ja tioolisuunaliste ristsidujate kaudu.HRP on antikehade jaoks kõige soovitavam märgis, kuna see on kolmest kõige populaarsemast ensüümmärgisest (peroksüdaas, β-galaktosidaas, aluseline fosfataas) väikseim ja stabiilsem ning selle glükosüülimine viib madalamale mittespetsiifilisele seondumisele.Glutaraldehüüdi ja perjodaadi konjugatsioonimeetodite ülevaade on avaldatud.
Peroksidaasi kasutatakse ka glükoosi4 ja peroksiidide määramiseks lahuses.Mitmed publikatsioonid, 6–24 teesid, 25–29 ja väitekirjad 30–46 on viidanud P8375 kasutamisele oma uurimisprotokollides.
Keemiline struktuur
Spetsifikatsioon
Testitavad esemed | Tehnilised andmed |
Kirjeldus | Punakaspruun amorfne pulber, lüofiliseeritud |
Tegevus | ≥100U/mg |
Puhtus (SDS-PAGE) | ≥90% |
Lahustuvus (10mg pulber/ml) | Selge |
Ensüüme saastavad | |
NADH/NADPH oksüdaas | ≤0,1% |
Katalaas | ≤0,005% |
ATPaas | ≤0,03% |
Transport ja ladustamine
Transport:Tarnitakse temperatuuril alla 2-8°C
Hoiustamine:Hoida temperatuuril -20°C (pikaajaline), 2-8°C (lühiajaline)
Soovitatav kordustestElu:2 aastat