Hiire genotüübi määramise komplekt

Kassi nr: HCR2021A

See toode on komplekt, mis on loodud hiire genotüüpide kiireks tuvastamiseks, sealhulgas DNA toorekstraktsiooni ja PCR amplifikatsioonisüsteemi jaoks.Toodet saab kasutada PCR amplifikatsiooniks otse hiire sabast, kõrvast, varvast ja muudest kudedest pärast lihtsat lõhustamist lüüsipuhvriga ja proteinaas k-ga.Ei vaja üleöö kääritamist, fenool-kloroformi ekstraheerimist ega kolonni puhastamist, mis on lihtne ja lühendab katsete aega.Toode sobib kuni 2 kb suuruste sihtfragmentide amplifitseerimiseks ja kuni 3 paari praimeritega mitmekordseks PCR reaktsiooniks.2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix sisaldab geneetiliselt muundatud DNA polümeraasi, Mg²⁺, dNTP-d ja optimeeritud puhversüsteem, et tagada kõrge amplifikatsioonitõhusus ja inhibiitoritaluvus, nii et PCR-reaktsioone saab läbi viia, lisades matriitsi ja praimereid ning rehüdreerides toodet 1 ×.Selle tootega amplifitseeritud PCR-produktil on 3'-otsas silmapaistev "A" alus ja seda saab pärast puhastamist kasutada otse TA kloonimiseks.

Komponendid

Säilitamistingimused

Tooteid tuleb hoida temperatuuril -25-15 ℃ 2 aastat.Pärast sulatamist võib lüüsipuhvrit hoida lühiajaliseks mitmekordseks kasutamiseks temperatuuril 2–8 ℃ ja kasutamise ajal hästi segada.

Rakendus

See toode sobib hiire knockout analüüsiks, transgeensete ainete tuvastamiseks, genotüpiseerimiseks ja nii edasi.

Funktsioonid

1.Lihtne toiming: pole vaja genoomset DNA-d eraldada;

2.Lai kasutusala: sobib erinevate hiirekudede otseseks võimendamiseks.

Juhised

1.Genoomilise DNA vabanemine

1) Lüsaadi valmistamine

Koelüsaat valmistatakse vastavalt lüüsitavate hiireproovide arvule (koelüsaat tuleks valmistada kohapeal vastavalt doseerimisele ja kasutamiseks põhjalikult segada) ning ühe proovi jaoks vajalike reaktiivide osakaal on järgmine:

2) Proovi ettevalmistamine ja lüüsimine

Soovitatav kudede kasutamine

Võtke puhastesse tsentrifuugituubidesse sobiv kogus hiire koeproove, lisage igasse tsentrifuugituubi 200 μL värsket koelüsaati, segage ja loksutage, seejärel inkubeerige 55 ℃ juures 30 minutit ja seejärel kuumutage 98 ℃ juures 3 minutit.

3) Tsentrifuugimine

Loksutage lüsaati hästi ja tsentrifuugige 12 000 pööret minutis 5 minutit.Supernatanti saab kasutada matriitsina PCR amplifikatsioonil.Kui matriitsi on säilitamiseks vaja, viige supernatant teise steriilsesse tsentrifuugi katsutisse ja hoidke -20 ℃ juures 2 nädalat.

2.PCR amplifikatsioon

Eemaldage 2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix temperatuurilt -20 ℃ ja sulatage jääl, segage tagurpidi ja valmistage ette PCR reaktsioonisüsteem vastavalt järgmisele tabelile (töötage jääl):

Märge:

a) Lisatav kogus ei tohiks ületada 1/10 süsteemist ja kui lisatakse liiga palju, võib PCR amplifikatsioon olla pärsitud.

Soovitatavad PCR tingimused

Märge:

a) Lõõmutustemperatuur: Lähtudes praimeri Tm väärtusest, on soovitatav määrata lõõmutamise temperatuur krundi väiksemale Tm väärtusele +3 ~ 5 ℃.

Levinud probleemid ja lahendused

1.Sihitud ribasid pole

1) Liigne lüüsiprodukt.Valige kõige sobivam malli kogus, tavaliselt mitte rohkem kui 1/10 süsteemist;

2) Liiga suur valim.Lahjendage lüsaati 10 korda ja seejärel amplifitseerige või vähendage proovi suurust ja taaslüüsige;

3) Koeproovid ei ole värsked.Soovitatav on kasutada värskeid koeproove;

4) Krundi halb kvaliteet.Kasutage amplifikatsiooniks genoomset DNA-d, et kontrollida praimeri kvaliteeti ja optimeerida praimeri disaini.

2.Mittespetsiifiline võimendus

1) Lõõmutustemperatuur on liiga madal ja tsükli number liiga kõrge.Suurendage lõõmutamistemperatuuri ja vähendage tsüklite arvu;

2) Malli kontsentratsioon on liiga kõrge.Pärast võimendamist vähendage malli kogust või lahjendage malli 10 korda;

3) Kehv praimeri spetsiifilisus.Optimeerige praimeri kujundust.

Märkmed

1.Proovidevahelise ristsaastumise vältimiseks tuleks ette valmistada mitu proovivõtuvahendit ja korduva kasutamise korral võib tööriistade pinda pärast iga proovivõttu puhastada 2% naatriumhüpokloriti lahuse või nukleiinhappepuhastusvahendiga.

2.Soovitatav on kasutada värskeid hiirekudesid ja proovivõtu maht ei tohiks olla liiga suur, et vältida amplifikatsioonitulemuste mõjutamist.

3.Lüüsipuhver peaks vältima sagedast külmutamist-sulatamist ning lühiajaliseks mitmekordseks kasutamiseks võib seda hoida temperatuuril 2–8 ℃.Madalal temperatuuril säilitamisel võib tekkida sade, mis tuleb enne kasutamist täielikult lahustuda.

4.PCR-i segu peaks vältima sagedast külmutamist-sulatamist ja seda võib lühiajaliseks korduvaks kasutamiseks hoida temperatuuril 4 ℃.

5.See toode on mõeldud ainult teaduslikeks eksperimentaalseteks uuringuteks ja seda ei tohiks kasutada kliinilises diagnoosimises ega ravis.