DNAaas I
DNaas I (desoksüribonukleaas I) on endodesoksüribonukleaas, mis suudab seedida ühe- või kaheahelalist DNA-d.See tunneb ära ja lõikab fosfodiestersidemeid, et toota monodeoksünukleotiide või ühe- või kaheahelalisi oligodeoksünukleotiide, mille 5'-otsas on fosfaatrühmad ja 3'-otsas hüdroksüülrühmad.DNaas I aktiivsus sõltub Ca2+-st ja seda võivad aktiveerida kahevalentsed metalliioonid nagu Mn2+ ja Zn2+.5mM Ca2+ kaitseb ensüümi hüdrolüüsi eest.Mg2+ juuresolekul võib ensüüm juhuslikult ära tunda ja lõigata mis tahes saidi mis tahes DNA ahelas.Mn2+ juuresolekul saab DNA kaksikahelaid samaaegselt ära tunda ja peaaegu samast kohast lõhustada, moodustades lamedate otstega DNA fragmente või kleepuva otsaga DNA fragmente, mille väljaulatuvad 1-2 nukleotiidid.
Toote omadus
Veiste pankrease DNaas I ekspresseeriti pärmi ekspressioonisüsteemis ja puhastati.
Ckomponendid
| Komponent | Helitugevus | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNaas I, RNaasivaba | 20 μL | 200 µl | 1 ml | 10 ml |
| 10 × DNAase I puhver | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transport ja ladustamine
1. Ladustamise stabiilsus: – 15 ℃ ~ -25 ℃ ladustamiseks;
2. Transpordi stabiilsus: transport jääpakkide all;
3. Tarnitakse: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glütserool, pH 7,6 temperatuuril 25 ℃.
Ühiku määratlus
Üks ühik on defineeritud kui ensüümi kogus, mis lagundab täielikult 1 µg pBR322 DNA-d 10 minutiga temperatuuril 37 °C.
Kvaliteedi kontroll
RNaas:5 U DNaasi I koos 1,6 μg MS2 RNA-ga 4 tunni jooksul temperatuuril 37 ℃ ei põhjusta agaroosgeelelektroforeesiga määratud lagunemist.
Bakteriaalne Endotoksiin:LAL-test, vastavalt Hiina farmakopöa IV 2020. aasta väljaandele, geelipiiri katsemeetod, üldreegel (1143).Bakterite endotoksiinide sisaldus peaks olema ≤10 EU/mg.
Kasutusjuhend
1. Valmistage reaktsioonilahus RNaasi-vabas katseklaasis vastavalt allpool loetletud proportsioonidele.
| Komponent | Helitugevus |
| RNA | X μg |
| 10 × DNAase I puhver | 1 μL |
| DNaas I, RNaasivaba (5U/μL) | 1 U μg RNA kohta |
| ddH2O | Kuni 10 μL |
2,37 ℃ 15 minutit;
3. Lisage reaktsiooni peatamiseks terminatsioonipuhver ja kuumutage DNaas I inaktiveerimiseks 10 minutit temperatuuril 65 ℃. Proovi saab kasutada otse järgmises transkriptsioonikatses.
Märkmed
1. Kasutage 1 U DNaas I μg RNA kohta või 1 U DNaas I vähem kui 1 μg RNA kohta.
2. EDTA tuleks lisada lõppkontsentratsioonini 5 mM, et kaitsta RNA-d lagunemise eest ensüümi inaktiveerimise ajal.
