CHO HCP ELISA komplekt
Selles analüüsis kasutatakse üheastmelist immunosorbent-ELISA meetodit.CHOK1 HCP-d sisaldavad proovid reageerivad samaaegselt ELISA plaadile kaetud HRP-märgistatud kitse anti-CHOK1 antikeha ja anti-CHOK1 antikehaga, moodustades lõpuks tahkefaasilise antikeha-HCP-märgistatud antikeha kihilise kompleksi.Seondumata antigeen-antikeha saab eemaldada ELISA plaadi pesemisega.Piisava reaktsiooni tagamiseks lisatakse süvendisse TMB substraat.Värvuse tekkimine peatatakse pärast stopplahuse lisamist ja reaktsioonilahuse OD ehk neeldumise väärtus 450/650 nm juures loetakse mikroplaadilugejaga.OD väärtus või neeldumise väärtus on võrdeline HCP sisaldusega lahuses.Selle põhjal saab standardkõvera järgi arvutada HCP kontsentratsiooni lahuses.
Rakendus
Seda komplekti kasutatakse CHOK1 peremeesraku valgu jääkide sisalduse kvantitatiivseks tuvastamiseks proovides.
Ckomponendid
| S/N | Komponent | Keskendumine | Säilitamistingimused |
| 1 | CHOK1 HCP standard | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃, valguse eest kaitsta |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, valguse eest kaitstult |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Peatage lahendus | NA | RT |
| 6 | Mikroplaadi tihendajad | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Kõrge adsorptsiooniga eelkatteplaadid | NA | 2-8℃ |
Vajalik varustus
| Kulumaterjalid / seadmed | Tootmine | Kataloog |
| Mikroplaadi lugeja | Molekulaarsed seadmed | Spectra Max M5, M5e või samaväärne |
| Termomikser | Eppendorf | Eppendorf/5355 või samaväärne |
| Vortex segisti | IKA | MS3 Digital või samaväärne |
Säilitamine ja stabiilsus
1.Transport temperatuuril -25~-15°C.
2.Säilitustingimused on näidatud tabelis 1;komponente 1-2 säilitatakse temperatuuril ≤-20°C, 5-6 säilitatakse toatemperatuuril,3、4, 7, 8 säilitatakse temperatuuril 2-8 ℃;kehtivusaeg on 12 kuud.
Toote parameetrid
1.Tundlikkus: 1ng/ml
2.Tuvastamisvahemik: 3-100 ng/ml
3.Täpsus: testisisene CV ≤ 10%, analüüsidevaheline CV ≤ 15%
4.HCP katvus: >80%
5.Spetsiifilisus: see komplekt on universaalne, kuna see reageerib spetsiifiliselt CHOK1 HCP-ga, sõltumata puhastusprotsessist.
Reaktiivi ettevalmistamine
1.PBST 0,05%
Võtke 15 ml 20 × PBST 0,05%, lahjendatud ddH-ga2O ja mahuti 300 ml-ni.
2.1,0% BSA
Võtke pudelist 1 g BSA-d ja lahjendage 100 ml PBST 0,05%, segage hästi kuni täieliku lahustumiseni ja hoidke temperatuuril 2–8 °C.Valmistatud lahjenduspuhver kehtib 7 päeva.Soovitatav on valmistada vastavalt vajadusele.
3.Tuvastamislahus 2μg/mL
Võtke 48 μL 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP ja lahjendage 11 952 μL 1% BSA-ga, et saada lõplikuks kontsentratsiooniks 2 μg/mL tuvastamislahust.
4.QC ja CHOK1 HCP standardite ettevalmistamine
| Toru Ei. | Originaal | Keskendumine | Helitugevus | 1% BSA | kogumaht | Lõplik |
| A | Standard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabel: QC ja standardite koostamine
Analüüsi protseduur
1.Valmistage reaktiivid ette ülaltoodud jaotises "Reaktiivi ettevalmistamine".
2.Võtke igasse süvendisse 50 μL standardeid, proove ja QC-sid (vt tabel 3), seejärel lisage 100 μL tuvastamislahust (2 μg/mL);Katke plaat tihendiga ja asetage ELISA plaat termosegistile.Inkubeerige 2 tundi 500 pööret minutis, 25±3 ℃.
3.Pöörake mikroplaat kraanikausis ümber ja visake kattelahus ära.ELISA plaadi pesemiseks pipetige igasse süvendisse 300 μL 0,05% PBST ja lahuse äraviskamiseks ning korrake pesemist 3 korda.Pöörake plaat puhtale paberrätikule ja kuivatage.
4.Lisage igasse süvendisse 100 μL TMB substraati (vt tabel 1), sulgege ELISA plaat ja inkubeerige pimedas temperatuuril 25 ± 3 ℃ 15 minutit.
5.Pipeteerige igasse süvendisse 100 μL stopplahust.
6.Mõõtke mikroplaadilugejaga neeldumist lainepikkusel 450/650 nm.
7.Analüüsige andmeid SoftMaxi või samaväärse tarkvara abil.Joonistage standardkõver nelja parameetriga logistilise regressioonimudeli abil.
Standardkõvera näide
MÄRKUS. Kui HCP kontsentratsioon proovis ületab standardkõvera ülemise piiri, tuleb see enne testimist korralikult lahjendada lahjenduspuhvriga.
MÄRKUSED
Peatuslahus on 2M väävelhape, palun käsitsege ettevaatlikult, et vältida pritsmeid!
